食品微生物实验室工作人员，需要有严格的无菌观念，许多试验要求在无菌条件下进行，主要原因：
一是防止试验操作中人为污染样品；
二是保证工作人员安全，防止检出的致病菌由于操作不当造成个人污染。

无菌间使用要求

 1.无菌间通向外面的窗户应为双层玻璃，并要密封，不得随意打开并设有与无菌间大小相应的缓冲间及

推拉门，另设有0.5-0.7m2的小窗，以备进入无菌间后传递物品。

2.无菌间内应保持清洁，工作后用2%-3%煤酚皂溶液，擦拭工作台面，不得存放与实验无关的物品。

3.无菌间使用前后应将门关紧，打开紫外灯，如采用室内悬吊紫外灯时，需30W紫外灯，距离

在1.0m处，照射时间不少于30min，使用紫外灯，应注意不得直接在紫外线下操作，以免引起损伤，灯管

每隔两周需用酒精棉球轻轻擦拭，除去上面灰尘和油垢，以减少紫外线穿透的影响。

4.处理和接种食品标本时，进入无菌间操作，不得随意出入，如需要传递物品，可通过小窗传递。

5.在无菌间内如需要安装空调时，则应有过滤装置。

要求

 

微生物检测用的玻璃器皿、金属用具及培养基、被污染和接种的培养物等，需要经后方能使用。

 

（一）干热和湿热高压蒸气锅方法

 

1.前准备

 

（1）所有需要的物品首先应清洗晾干，玻璃器皿如吸管、平皿用纸包装严密，如用金属筒应将上面通气孔打开。

 

（2）装培养基的三角瓶塞，用纸包好，试管盖好盖，注射器须将管芯抽出，用纱布包好。

 

2.装放

 

（1）干热器：装放物品不可过挤，且不能接触箱的四壁。

 

（2）大型高压蒸气锅：放置物品分别包扎好，直接放入筒内，物品之间不能过挤。

 

3.设备检查

 

（1）检查门的开关是否灵活，橡皮圈有无损坏，是否平整。

 

（2）检查压力表蒸气排尽时是否停留在零位，关好门和盖，通蒸气或加热后，观察是否漏气，压力表与温度计所标示的状况是否吻合，管道有无堵塞。

 

（3）对有自动电子程序控制装置的器，使用前应检查规定的程序，是否符合于进行处理的要求。

 

4.处理

 

(1)干热法：

 

此法适应于在干热情况下，不损坏、不变质、不蒸发的物品、较常用于玻璃器皿、金属制品、陶瓷制品等的。

 

①器械器皿应清洗后再干烤，以防附着在表面的污物炭化。

 

②时安放物品不能过挤，不要直接接触底和箱壁，物品之间留有空隙。

 

③菌时将箱门关紧，接上电源，先将排气孔打开约30min，排除器中的冷空气，温度升至160℃调节指示灯，维持1.5–2h。

 

④完毕后或温度升温过程中，须在60℃以下才能打开箱门。

 

(2)手提式高压锅或立式压力蒸气器的使用应按下列步骤进行：

 

①手提式高压锅在主体内加入3L清水，立式高压锅加水16L（重复使用时应将水量补足，水变混浊需更换）；

 

②手提式压力锅将顶盖上的排气管插入桶内壁的方管中（无软管或软管锈蚀破裂的器不得使用）；

 

③盖好顶盖拧紧，勿使漏气；置器于火源上加热，立式压力锅通上电源，并打开顶盖上的排气阀放了冷气（水沸腾后排气10-15min）；

 

④关闭排气阀，使蒸气压上升到规定要求，并维持规定时间（按物品性质与有关情况而定）；

 

⑤达到规定时间后，对需干燥的物品，立即打开排气阀排出蒸气，待压力恢复到零时，自然冷却至60℃后开盖取物，如为液体物品，不要打开排气阀，而应立即将锅去除热源，待自然冷却，压力恢复至零，温度降到60℃以下 再开盖取物，以防突然减压液体剧烈沸腾或容器爆破；

 

(3)卧式压力锅蒸气器的使用按下列步骤进行：

 

①关紧锅门，打开进气阀，将蒸气引入夹层进行预热，夹层内冷空气经阻气器自动排出。②夹层达到预定温度后，打开锅室进气阀，将蒸气引入锅室，锅室内冷空气经锅室阻气器自动排出。

 

③待锅室达到规定的压力与温度时，调节进气阀，使保持恒定

 

④自然或人工降温至60℃再开门取物，不得使用快速排出蒸气法，以防突然降压，液体剧烈沸腾或容器爆破。

 

⑤使用自动程序控制式压力蒸气器，在放好物品关紧门后，应根据物品类别按动相应开关，以便按要求程序自动进行，时需要利用附设仪表记录温度与时间以备查，操作要求应严格按照厂家说明书进行。

 

5.温度与时间

 

(1) 干热器温度160℃，1.5-2h。

 

(2) 压力蒸气锅温度与时间

 

（二）间歇方法

 

1.方法系：

 

利用不加压力的蒸气，某些物质经高压蒸气容易破坏，可用此法。

 

（1）将欲物品置于锅内，盖上顶盖，打开排水口，使器内余水排尽。

 

（2）关闭排水口，打开进气门，根据需要10～20min。

 

（3）完毕关闭进气门，取出物品待冷至室温温度，放入37℃温箱过夜，次日仍按上述方法，如此三次，即可达到目的。

 

2.血清凝固器使用方法:

 

培养基中含有血清或鸡蛋特殊成份时，因高热会破坏其营养成份，故用低温，可使血清凝固，又可达到目的：

 

(1) 在使用该法的血清等分装时，需严格遵守无菌操作，试管、平皿也经后使用。

 

(2)将培养基按要求使成斜面或高层，加足水后，接上电源，升温75～90℃1h，放37℃温箱过夜，再如此三次。

 

3.煮沸：

 

可用煮锅或煮沸器，水沸腾后再煮5～15 min，也可在水中加入2%石炭酸煮沸5min，加入0.02%醛，80℃煮60min均可达到目的，但选用煮沸的增消剂时，应注意对物品的腐蚀性。

 

4.处理:

 

后物品，按正常情况已属无菌，从器中取出应仔细检查放置，以免再度污染；

 

(1)物品取出，随即检查包装的完整性，若有破坏或棉塞脱掉，不可作为无菌物品使用；

 

(2)取出的物品，如为包装有明显的水浸者，不可作为无菌物品使用；

 

(3)培养基或试剂等，应检查是否符合达到后的色泽或状态，未达到者应废弃；

 

(4)启闭式容器，在取出时应将筛孔关闭；

 

(5)取出的物品掉落在地或误放不洁这处,或沾有水液,均视为受到污染,不可作为无菌物品使用；

 

(6)取出的合格物品，应存放于贮藏室或防尘柜内，严禁与未物品混放；

 

(7)凡属合格物品，应标有日期及有效期限；

 

(8)每批处理完成后，记录品名、数量、温度、时间、操作者。

四.有毒有菌污物处理要求

 

微生物实验所用实验器材、培养物等未经处理，一律不得带出实验室。

 

1.经培养的污染材料及废弃物应放在严密的容器或铁丝筐内，并集中存放在指定地点，待统一进行高压。

 

2.经微生物污染的培养物，需要经121℃，30min高压。

 

3.染菌后的吸管，使用后放入5%煤酚皂溶液或石炭酸液中，少浸泡24h（液体不得低于浸泡的高度）再经121℃，30min高压。

 

4.涂片染色冲洗片的液体，一般可直接冲入下水道，烈性菌的冲洗液需要冲在烧杯中，经高压后方可倒入下水道，染色的玻片放入5%煤酚皂溶液中浸泡24h后，煮沸洗涤。做凝集试验用的玻片或平皿，需要高压后洗涤。

 

5.打碎的培养物，立即用5%煤酚皂溶液或石炭酸液喷洒和浸泡被污染部位，浸泡半小时后再擦拭干净。

 

污染的工作服或进行烈性试验所穿的工作服、帽、口罩等，应放入专用袋内，经高压后方能洗涤。

 

五.培养基制备要求

 

培养基制备的质量将直接影响微生物生长。因为各种微生物对其营养要求不完全相同，培养目的的不同，各种培养基制备要求如下：

 

1.根据培养基配方的成分按量称取，然后溶于蒸馏水中，在使用前对应用的试剂药品应进行质量检验。

 

2.pH测定及调节：pH测定要在培养基冷至室温时进行，因在热或冷的情况下，其pH有一定差异，当测定好时，按计算量加入碱或酸混匀后，应再测试一次。培养基pH值一定要准确，否则会影响微生物的生长或影响结果的观察。但需注意因高压可影响一些培养基的PH降低或升高，故不宜压力过高或次数太多，以免影响培养基的质量，指示剂、去氧胆酸钠、琼脂等一般在调完pH后再加入。

 

3.培养基需保持澄清，便于观察细菌的生长情况，培养基加热煮沸后，可用脱脂棉花或绒布过滤，以除去沉淀物，必要时可用鸡蛋白澄清处理，所用琼脂条要预先洗净晾干后使用，避免因琼脂含杂质而影响透明度。

 

4.盛装培养基不宜用铁、铜等容器，使用洗净的中性硬质玻璃容器为好。

 

5.培养基的既要达到完全目的，又要注意不因加热而降低其营养价值，一般121℃，15min即可，如为含有不耐高热物质的培养基如糖类、血清、明胶等，则应采用低温或间歇法，一些不能加热的试剂如亚碲酸钾、卵黄、TTC、素等，待基础琼脂高压后凉至50℃左右再加入；

 

6.每批培养基制备好后，应做无菌生长试验及所检菌株生长试验。如果是生化培养基，使用标准菌株接种培养，观察生化反应结果，应呈正常反应，培养基不应贮存过久，必要时可置4℃冰箱存放。

 

7.目前，各种干燥培养基较多，每批需用标准菌株进行生长试验或生化反应观察，各种培养基用相应菌株生长试验良好后方可应用，新购进的或存放过久的干燥培养基，在配制时也应测PH，使用时需根据产品说明书用量和方法进行。

 

8.每批制备的培养基所用化学试剂、情况及菌株生长试验结果、制作人员等应做好记录，以备查询。

 

六.样品采集及处理要求

 

1.所采集的检验样品一定要具有代表性，采样时应首先对该批食品原料、加工、运输、贮藏方法条件、周围环境卫生状况等进行详细调查，检查是否有污染源存在。

 

2.根据食品的种类及数量，采样数量及方法应按标准检验方法的要求进行。

 

3.采样应注意无菌操作，容器需要，避免环境中微生物污染，容器不得使用煤酚皂溶液，用新洁尔灭、酒精等，更不能含有此类或类，以避免杀死样品中的微生物，所用剪、刀、匙用具也需方可应用。

 

4.样品采集后应立即送往检验室进行检验，送检过程中一般不超过3h，如，路程较远，可保存在1～5℃环境中，如需冷冻者，则在冻存状态下送检。

 

5.检验室收到样品后，进行登记（样品名称、送检单位、数量、日期、编号等），观察样品

的外观，如果发现有下列情况之一者，可拒绝检验：

 

(1)样品经过特殊高压、煮沸或其他方法者，失去代表原食品检验意义者；

 

(2)瓶、袋装食品已启开者，熟肉及其制品、熟禽等食品已折碎不完整者，即失去原食品形状者（食物中毒样品除外）；

 

(3)按规定采样数量不足者；对送检符合要求的样品，检验室收到后，应立即进行检验，如果条件不具备，应置4℃冰箱存放，及时准备创造条件，然后进行检验。

 

6.样品检验时，根据其不同性状，进行适当处理。

 

(1)液体样品接种时，应充分混合均匀，按量吸取进行接种。

 

(2)固体样品，用刀、剪取其不同部位共25g，置于225mL生理盐水或其他溶液中，用均质器搅碎混匀后，按量吸取接种。

 

(3)瓶、袋装食品应用操作启开，根据性状选择上述方法处理后接种。

 

七.样品检验、记录和报告的要求

 

1.检验室收到样品后，首行外观检验，及时按照标准检验方法进行检验，检验过程中要认真、负责、严格进行无菌操作，避免环境中微生物污染。

 

2.样品检验过程中所用方法、出现的现象和结果等均要用文字写出试验纪录，以作为对结果分析、判定的依据，记录要求详细、清楚、真实、客观、不得涂改和伪造。

 

来源：现代实验室装备网

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